小鼠B、T淋巴细胞衰减因子真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

• 作者: 周晶 夏丽坤 张胜男 陈琳琳
• 来源期刊: 眼科研究
• 学科: 医学
• 关键词: B、T淋巴细胞衰减因子 真核表达载体 基因转染
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 295-299
• 页数: 5页
• 分类号: R392.12|R772.21
• 字数: 4239字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-0808.2010.04.002

摘要

目的 构建小鼠B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的真核表达载体,并分析其在人胚肾HEK293细胞中的表达,为单纯疱疹性角膜基质炎的免疫治疗奠定基础.方法 应用PCR法获得小鼠BTLA胞外功能区的cDNA片段,将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得重组表达质粒pBTLA,经酶切鉴定和测序正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光法、实时定量PCR(real-time PCR)、Western blot技术检测BTLA在细胞中的表达.结果 重组质粒pBTLA经酶切鉴定和测序,确认插入序列正确,与基因文库中提供的基因序列同源性达98%～100%.Real-time PCR检测可见转染了重组质粒pBTLA的HEK293细胞内BTLA mRNA表达增强(P=0.00),3个组间HEK293细胞内BTLA mRNA表达差异有统计学意义(F=167.83,P=0.00);Western blot结果 显示,转染重组质粒pBTLA的HEK293细胞内BTLA蛋白表达明显增强,转染后24～48h表达最强.间接免疫荧光结果 显示BTLA蛋白主要表达在HEK293细胞的细胞膜和细胞质中.结论 成功构建了BTLA的真核表达载体,该重组质粒在HEK293细胞中能够表达BTLA,为后续研究BTLA在抗病毒免疫中的作用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏丽坤	中国医科大学附属盛京医院眼科	54	233	8.0	12.0
2	张胜男	中国医科大学附属盛京医院眼科	8	35	4.0	5.0
3	陈琳琳	沈阳市第四医院眼科	12	12	2.0	2.0
4	周晶	沈阳市第四医院眼科	3	14	1.0	3.0