副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术的建立与应用

• 作者: 丁鹏 于江 刘少宁 刘洋 吴家强 周顺 张玉玉 张金强 徐绍建 李俊 李坤 王兆 王文志 王金宝
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 infB 基因 SYBR Green I 荧光定量 PCR
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 77-81
• 分类号: S811.5
• 字数: 3547字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2010.04.018

摘要

根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I 荧光定量PCR检测HPS的技术.试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增.将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品.结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%.临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测.