Nodal蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 万永奇 吴秀山 宋怀婷 李永青 梁洁 江志钢 王跃群 莫小阳 袁婺洲 邓云
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Nodal 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 813-816
• 分类号: Q78
• 字数: 2808字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2010.06.017

摘要

斑马鱼心脏发育模型中Nodal编码转录因子调节心脏的左右不对称发育,为了进一步研究Nodal信号途径在心脏发育中的调控作用和心脏疾病发生的分子机制,需要获得斑马鱼Nodal蛋白并制备其抗体.采用从斑马鱼心脏组织中提取RNA,通过反转录得到心脏组织各种表达基因的cDNA为模板,PCR扩增得到Nodal部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达.经酶切及测序鉴定后,转化Rosseta细菌,并用IPTG诱导表达融合蛋白,Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blotting检测抗体.获得了Nodal原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Nodal多克隆抗体,为Nodal功能的进一步研究奠定了基础.