高效絮凝素毕赤酵母表面展示系统的构建

• 作者: 林影 郑穗平 韩双艳 韩振林
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 酵母表面展示 毕赤酵母 米黑根毛霉脂肪酶 N端锚定系统 C端锚定系统
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 200-207
• 页数: 8页
• 分类号: Q814.4|Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00484

摘要

为了获得高效的脂肪酶毕赤酵母表面展示系统,利用来自酿酒酵母絮凝素蛋白Flo1的N端874个氨基酸残基(FS)和C端的1 101个氨基酸残基(FL)作为锚定蛋白分别构建了2套载体系统.带有前肽的米黑根毛霉脂肪酶(ProRML)克隆到构建的2套展示载体中,使米黑根毛霉脂肪酶(RML)分别以N端锚定或C端锚定的方式实现在毕赤酵母细胞表面的展示.利用RML C端的Flag标签,通过流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜检测2套系统中RML在酵母表面的展示情况.研究发现,N端锚定于酵母表面的展示酶FSR以pNPC为底物时,水解活力达到了105.3 U/g,大约为C端锚定的展示酶FLR活力的2倍.同时FSR比FLR具有更宽的温度、pH作用范围和更好的热稳定性.与游离酶和固定化酶相比,展示酶FSR也表现出更为优良的热稳定性.结果提示,基于Flo1 N端锚定的展示系统更适合展示活性中心近C端的脂肪酶,推动了展示酶的进一步研究和开发.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑穗平		56	474	12.0	19.0
2	韩双艳		58	583	12.0	22.0
3	林影		102	965	18.0	27.0
4	韩振林		2	11	1.0	2.0