基于差异蛋白质组学解析一贯煎对大鼠肝硬化形成的影响

• 作者: 丁赛丹 刘平 申定珠 胡义扬 都金星 陈高峰 陶庆
• 来源期刊: 中西医结合学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝硬化 四氯化碳 一贯煎 蛋白质组学 铜/锌超氧化物歧化酶 DJ-1 大鼠
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 158-167
• 页数: 10页
• 分类号: R5
• 字数: 7963字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3736/jcim20100211

摘要

目的:基于差异蛋白质组学探讨一贯煎干预肝硬化的部分效应机制.方法:48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(n=12)及造模组(n=36),采用50%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)-橄榄油溶液1 mL/kg腹腔注射(2次/周,共9周)制备大鼠肝硬化模型.于开始造模后3周和6周分别随机处死6只大鼠,作药物干预前的动态观察,其余24只模型大鼠于开始造模后第7周首日随机分为模型组(n=12)及一贯煎干预组(n=12).大鼠于第9周末全部处死取材.双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离肝组织总蛋白,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱及数据库查询鉴定差异表达蛋白质;差异蛋白质铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase, Cu/Zn SOD)和DJ-1表达采用蛋白印迹法及免疫组织化学方法进行验证.结果:获得分辨率高、重复性好的肝组织2-DE图谱,经质谱鉴定的50个差异蛋白质中,与氧化应激相关的5个蛋白质分别是Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽合成酶、谷胱甘肽S-转移酶Yb-1亚基、醛酮还原酶7,A2.与正常组大鼠比较,模型组肝组织Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2的表达均显著降低,其中Cu/Zn SOD、醛酮还原酶7,A2在造模3周、6周及9周后呈梯级下降,而DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶于造模3周、6周及9周后均呈低水平表达;谷胱甘肽合成酶表达显著升高.治疗结束后与模型组比较,一贯煎组Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2表达均明显增高,谷胱甘肽合成酶表达显著降低.蛋白印迹法及免疫组织化学验证了Cu/Zn SOD、DJ-1在蛋白表达水平的差异,与蛋白质组学结果基本一致.结论:抗氧化应激功能降低是CCl4致大鼠肝硬化的重要病理环节,提高抗氧化应激功能相关蛋白的表达可能是一贯煎治疗CCl4所致大鼠肝硬化的主要效应机制.