小鼠白细胞介素17A的克隆、表达及活性鉴定

• 作者: 于艺雪 任桂萍 刘铭瑶 叶贤龙 张薇 李德山 王文飞 高红梅
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠白细胞介素17 克隆 表达 包涵体 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 783-786
• 分类号: Q78
• 字数: 3633字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.09.004

摘要

目的:克隆小鼠白细胞介素17A(mIL-17A)基因,构建mIL-17A原核表达质粒在E.coil Rosetta(DE3)PlysS表达,得到有活性的mIL-17A蛋白.方法:提取人IL-1β免疫的小鼠胸腺总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-17A序列设计引物,进行巢式PCR,得到成熟mIL-17A的编码序列并构建到pMD18-T载体中,再亚克隆至原核表达载体pHisSUMO Express中,经DNA测序鉴定后转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定.纯化后的蛋白处理3T3-L1前体脂肪细胞,real time PCR鉴定白细胞介素6(IL-6)的表达变化.结果:DNA测序证明所克隆基因序列与GenBank报道的完全一致.成功构建了pHisSUMO Express-mIL-17A原核表达质粒以包涵体形式表达了重组mIL-17A蛋白,且Western blot证实为目的蛋白.所得蛋白上调3T3-L1细胞表达IL-6.结论:获得具有生物活性的mIL-17A蛋白,为进一步研究其蛋白特性及其生物活性奠定基础.