人支气管上皮细胞神经生长因子的信号传导通路

• 作者: 冯俊涛 朱锦琪 汤渝玲 胡成平
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 神经生长因子 哮喘神经源性炎症 丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 582-587
• 分类号: R734.2
• 字数: 4178字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2010.06.011

摘要

目的:研究神经生长因子(NGF)介导哮喘神经源性炎症的信号转导通路.方法:选用参与哮喘神经源性炎症的重要效应细胞-支气管气道上皮细胞株(NHBEC)作为研究对象.NHBEC于含体积分数为10%胎牛血清的达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基(DMEM)中培养.实验分8组:①A组:正常对照组;②B组:NGF组;③C组:NGF+丝裂素活化蛋白激酶抑制剂(PD98059)组;④D组:PD98059组;⑤E组:NGF+佛波酯(PMA)组;⑥F组:PMA组;⑦G组:NGF+酪氨酸磷酸化抑制剂(AG490)组;⑧H组:AG490组.分别进行细胞干预.干预后免疫印迹法半定量测定细胞原癌基因(c-fos)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白含量.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量检测各组细胞神经激酶1受体(NK-1R)mRNA含量.并应用免疫细胞化学定性观察各组细胞表达NK-1R的情况.结果:在NGF未处理的PD98059组及AG490组c-fos蛋白水平、磷酸化的ERK1/2蛋白水平几乎检测不到;而在NGF组,经NGF作用30 min后,可见c-fos蛋白水平及磷酸化的ERK1/2蛋白水平显著增高,c-fos/3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)及p-ERK/GAPDH光密度比值分别为(0.835 4±0.101 2)及(1.318 7±0.207 8),与正常对照组相比P<0.01.PD98059可明显抑制NGF诱导NHBEC表达c-fos蛋白及磷酸化的ERK1/2蛋白,c-fos/GAPDH及p-ERK/GAPDH光密度比值分别为(0.301 2±0.103 4)及(0.314 6±0.095 7),与NGF组相比P<0.01.PMA可刺激NGF诱导NHBEC表达c-fos及磷酸化的ERK1/2蛋白.而转录信号转导子与激活子3(Signal transducers and activators of transcription 3, STAT3)传导途径特异性抑制剂AG490则无此作用.免疫细胞化学研究结果显示:正常对照组及PD98059组NK-1R表达呈阴性反应;NGF组及NGF+PMA组呈强阳性反应;PMA组呈阳性反应;而NGF+PD98059组呈弱阳性反应.RT-PCR结果显示:与正常对照组相比,NK-1RmRNA在NGF未处理的PD98059组表达较少;而在NGF组,经NGF作用1h后,可见NK-1RmRNA水平显著增高(光密度比值为1.068 2±0.159 7),与正常对照组(光密度比值为0.375 3±0.064 2)相比P<0.01.PD98059可抑制NGF诱导NHBEC表达NK-1R mRNA(光密度比值为0.478 7±0.098 1).PMA可刺激NGF诱导NHBEC表达NK-1R mRNA.结论:NGF通过上调NHBEC NK-1R的表达,参与哮喘神经源性炎症;NGF上调NHBEC表达NK-1R可能通过激活丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路( Ras/MAPK/c-fos信号传导通路)实现的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡成平	中南大学湘雅医院呼吸科	314	2001	22.0	29.0
2	冯俊涛	中南大学湘雅医院呼吸科	32	191	9.0	12.0
3	朱锦琪	中南大学湘雅医院呼吸科	8	101	6.0	8.0
4	汤渝玲	长沙市第一医院呼吸科	30	68	4.0	7.0