新基因NBEAL1的克隆、表达、纯化及其与胶质瘤病理分级的相关性

• 作者: 刘彬 宋华 崔大祥 李娜 杨浩 盛平 胡国汉 鲍晨晨
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: neurobeachin like 1(NBEAL1) 基因克隆 基因表达 脑胶质瘤
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 77-81
• 页数: 5页
• 分类号: R739.41|R730.2
• 字数: 3314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.01.015

摘要

目的:构建新基因neurobeachin like 1(NBEAL1)的表达载体,研究NBEAL1的表达与胶质瘤病理分级的相关性.方法:提取人脑胶质瘤细胞U251的总RNA,构建pGEX-KG/NBEAL1表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导NBEAL1重组蛋白的表达,GST亲和纯化,Western blotting鉴定重组蛋白的纯度;以免疫组化法用纯化蛋白制备的单克隆抗体分析NBEAL1表达与胶质瘤病理分级的相关性.结果:NBEAL1基因片段被成功地克隆入pGEX-KG表达载体,测序证实克隆片段序列正确.NBEAL1融合蛋白在大肠杆菌BL21包涵体中表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯化的重组蛋白纯度95%以上.Western blotting证明所纯化的蛋白含有GST标签与NBEAL1肽段.免疫组化法检测显示NBEAL1蛋白的表达在正常脑组织中较低,而在低级别的脑胶质瘤组织中表达明显上调,但随着恶性程度增加NBEAL1的表达程度降低,两者呈负相关.结论:成功地克隆、表达及纯化NBEAL1蛋白,NBEAL1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达与其恶性程度呈负相关.