日本鳗鲡谷胱甘肽过氧化物酶1和4的克隆、分析和组织表达分布

• 作者: 刘振兴 孟轩 张健騑 曹艳林 林敏 柯浩
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 日本鳗鲡 谷胱甘肽过氧化物酶 Real-time RT-PCR 3D模型
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 439-447
• 分类号: S91
• 字数: 4385字
• 语种: 中文

摘要

采用RACE技术,克隆了日本鳗鲡(Anguilla japonica)谷胱甘肽过氧化物酶1和4(GPx1、GPx4)基因的完整编码序列(Complete coding sequence,CDS).GPx1基因全长993bp,5'非编码区(UTR)29bp,CDS 573bp,3'UTR 372bp,PolyA 19 bp;第803-898位碱基(位于3'UTR)形成1个硒半胱氨酸插入序列(Selenocysteine insertion sequence,SECIS),协助144-146位密码子TGA编码Sec.GPX4基因全长1 048 bp,5'UTR 115 bp,CDS 561 bp,3'UTR 346 bp,polyA 26 bp,第766-863位碱基(位于3'UTR)形成1个SECIS,协助299-301位密码子TGA编码Sec.GPx1包含190个氨基酸,分子量21.4kD,等电点8.04,第21位氨基酸具有1个潜在的N-糖基化位点.GPx4包含186个氨基酸,分子量21.4kD,等电点8.85,第68位和153位氨基酸具有2个潜在的N-糖基化位点.GPx1、GPx4均具有See、Trp、Gln和Asn构成的催化四联体.日本鳗鲡与其他脊椎动物相比,GPx1的核苷酸序列一致性为42.7%～60.2%,氨基酸序列一致性为56.4%～80.4%;GPx4的核苷酸序列一致性为46.5%～60.2%,氨基酸序列一致性为59.9%～81.2%.进化分析显示,脊椎动物的GPx1、GPx4分别占据进化树的不同分支.利用Swiss-Model预测了日本鳗鲡GPx1、GPx4单体的3D模型,序列分析显示,GPx1可以形成1个同源四聚体.本研究在克隆日本鳗鲡β-actin基因部分CDS序列的基础上,采用Real-time RT-PCR方法,检测了日本鳗鲡GPx1、GPx4基因表达,比较了GPx1、GPx4在鳃、皮肤、肌肉、肝、脾、肾、肠组织中的表达变化,发现在鳗鲡的肠、肌肉、肝脏等组织中GPx1、GPx4明显表达,并且GPx1的表达量高于GPxg.