荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定

• 作者: 于萍 刘开朗 卜登攀 李旦 王加启 赵圣国
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 瘤胃脲酶 分离纯化 活性电泳 LC-MS/MS 蛋白质组
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 动物营养
• 页码范围: 692-696
• 分类号: S823.91
• 字数: 3702字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在从荷斯坦奶牛瘤胃中分离活性脲酶.从奶牛瘤胃中收集瘤胃内容物,通过离心和超声破碎的方法得到不含菌体细胞的瘤胃液(CFRF)和瘤胃菌体蛋白液(RCP),利用85%硫酸铵盐析,并透析后,用HiTrap Capto Q离子交换层析柱纯化脲酶.将纯化后的脲酶用活性PAGE分离,并利用改良的Fishbein染色法,确定脲酶条带位置,切胶,经胰蛋白酶消化后,用LC-MS/MS分析,并用SEQUEST软件在NCBI数据库搜索与质谱信号相匹配的肽段和蛋白质.结果表明从CFRF和RCP中分离出较高活性的脲酶,但经染色后只有RCP脲酶显示活性条带.经质谱分析,最终鉴定出了3种微牛物来源脲酶,分别与嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、唾液链球菌(Streptococcus salivarius)和嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)相似.这说明绕过纯培养微生物,直接从瘤胃中分离脲酶,来研究其性质和来源是可行的,尤其适合对未培养微生物的研究.