用免疫蛋白质组学方法筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白

• 作者: 吴灶和 庞欢瑛 李岩 简纪常 鲁义善
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 哈氏弧菌 免疫蛋白质组学 全菌可溶性蛋白 双向电泳
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 635-642
• 分类号: S942.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2010.06687

摘要

用免疫蛋白质组学的研究方法鉴定了哈氏弧菌的免疫反应蛋白.将哈氏弧菌接种于TSB培养基28℃培养18 h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,一向电泳采用7 cmpH4～7的胶条进行等电聚焦,二向用12.5%的SDS-PAGE胶分离蛋白质,考马斯亮蓝染色,获得双向电泳图谱,再结合免疫转印技术检测免疫反应的蛋白质,利用ImageMaster 2D Platinum进行配对分析得到15个非特异性的免疫反应性蛋白点,30个特异性的免疫反应性蛋白点.经过鉴定得到13种非特异性的免疫反应性蛋白质,这其中有2对蛋白在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白;同时得到28种特异性的免疫反应性蛋白质,有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质,还有1对蛋白在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白.将特异性免疫反应蛋白鉴定结果与非特异性比较发现有1对蛋白鉴定为同一种蛋白;另外,No.17和No.19是F0F1 AFP synthase的两个亚基.特异性免疫反应蛋白鉴定结果中有6个蛋白质是已知的其他细菌的具有免疫反应的蛋白,分别为OmpN,OmpW,OmpU,alanine dehydrogenase,Elongation factor Ts(EF-Ts),cysteine synthase成功建立了哈氏弧菌的免疫蛋白质组学研究方法,筛选出28种具有特异性免疫反应的蛋白质,为哈氏弧菌的免疫蛋白研究提供理论依据和操作框架.