小反刍兽疫病毒P蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用

• 作者: 张海瑞 才学鹏 毛立 王秋霞 窦永喜 翟军军 蒙学莲 骆学农
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: PPRV P蛋白 表达 纯化 抗体制备 应用
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 995-1000
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 4357字
• 语种: 中文

摘要

本文旨在对小反刍兽疫病毒P蛋白进行原核表达,并利用表达的蛋白制备抗血清,然后用于间接免疫荧光检测.将构建好的pET-30a(+)-P重组表达质粒转化大肠杆菌构建P蛋白的原核表达体系.重组菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白得到了表达.通过对表达条件的优化,确定了P蛋白在28℃、IPTG诱导浓度为0.2 mmol·μL-1的条件下诱导6 h,可溶性P蛋白表达量最高.利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的P蛋白,然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠,制备了多克隆抗体,其滴度最高可达1∶25 600,而且特异性好,表明获得了P蛋白的多克隆抗体.同时利用所制备的抗体对pcDNA3.1/P真核表达进行了间接免疫荧光检测.P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,并制备了特异性好、滴度高的抗血清,为研究P蛋白功能奠定了基础.