肺炎链球菌ply基因缺陷菌株的构建及毒力变化的初步研究

• 作者: 何於娟 姜慧 崔瑾 张雪梅 李忱炜 王虹 胥文春 董杰 袁军 贺潇
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎链球菌 溶血素 长臂同源多聚酶链反应 毒力
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 993-997
• 分类号: R5
• 字数: 3644字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2010.11.006

摘要

目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)溶血素基因(pneumolysin,ply)缺陷菌株,并对其毒力作初步研究,为进一步探索宿主对溶血素的防御应答奠定基础.方法 采用长臂同源多聚酶链反应(LFH-PCR)技术将ply基因替换为红霉素耐药基因(erm)后同源重组于肺炎链球菌,在含红霉素的血平板上筛选出ply缺陷菌株.用PCR鉴定缺陷菌株,观察体外缺陷菌株生长情况,并在小鼠体内感染模型研究其毒力侵袭变化.结果 PCR结果显示ply基因完全被erm基因所替代,构建ply缺陷菌成功;单个菌落培养基生长情况表明ply基因缺陷并未对细菌的体外生长造成影响;但在小鼠鼻腔感染模型中,缺陷菌株入血时间(6 h)明显晚于野生菌株(2 h),且各时间点的菌量均显著低于野生菌株,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01);小鼠腹膜感染模型显示野生菌株半数致死时间为3 d,而缺陷菌株半数致死时间为18d,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 采用LFH-PCR技术作基因突变完全替代ply基因,方法简便快捷;ply的缺陷不影响细菌在体外的生长,但可显著降低细菌在宿主体内的毒力和侵袭.