小鼠增强型绿色荧光蛋白-过氧化物酶体增长因子活化受体γ2融合表达重组腺病毒的构建及表达

• 作者: 孔子任 孙钦策 廖丽姿 杨苗苗 田卫东 肖金刚
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 过氧化物酶体增长因子活化受体 重组腺病毒 骨髓间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 430-434
• 分类号: Q81
• 字数: 4081字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1182.2010.04.022

摘要

目的 构建小鼠增强型绿色荧光蛋白(EGFP)-过氧化物酶体增长因子活化受体(PPAR)γ2基因的腺病毒重组体,并检测其在感染病毒的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)中的表达.方法 从pcDNA flag PPARγ质粒上切取目的片段PPARγ2,克隆入pEGFP-C1和pEGFP-N1,以pEGFP-C1-PPARγ2为模板通过PCR技术获得EGFP-PPARγ2基因,酶切DC315质粒,获得DC315-EGFP-PPARγ2质粒,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox△E1、3Cre共转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒Ad-EGFP-PPARγ2,酶切鉴定证实构建成功.转染HEK293细胞并检测其体外表达情况,经HEK293细胞扩增后,测定病毒滴度,转染小鼠BMSC,72h后鉴定其成脂分化情况.结果 将pEGFP-C1-PPARγ2和pEGFP-N1-PPARγ2通过脂质体转染入HEK293细胞后,在倒置相差显微镜下观察,前者在细胞核内有较强的绿色荧光,后者的荧光强度则极低.对重组腺病毒进行酶切和PCR鉴定,证实含小鼠EGFP-PPARγ2的Ad5腺病毒载体构建成功.在倒置相差显微镜下观察到BMSC细胞核内有绿色荧光.结论 成功构建含小鼠EGFP-PPARγ2的重组Ad5腺病毒载体,为基因辅助的脂肪组织工程技术、抗肿瘤研究等提供了安全有效的转基因载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田卫东		168	919	14.0	18.0
2	肖金刚		14	61	4.0	7.0
3	孙钦策	四川大学生命科学学院	3	26	1.0	3.0
4	廖丽姿		2	6	1.0	2.0
5	杨苗苗		4	8	2.0	2.0
6	孔子任		2	3	1.0	1.0