荧光原位杂交技术检测土壤中博德特氏菌探针的设计与应用

• 作者: M.Schmid R.Schroll 王芳 蒋新
• 来源期刊: 土壤学报
• 学科: 地球科学
• 关键词: 博德特氏菌 寡核苷酸探针 荧光原位杂交 三氯苯降解
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 页码范围: 51-57
• 页数: 7页
• 分类号: X172|X53
• 字数: 5276字
• 语种: 中文

摘要

根据博德特氏菌(Bordetella sp.)的16S rRNA基因序列,设计荧光原位杂交(FISH)检测博德特氏菌的寡核苷酸探针FW_iso_62和FW_iso_761,在20% ～60%甲酰胺均有很强的荧光信号.采用探针 FW_iso_62 及其竞争探针,结合Nycodenz和DAPI技术,建立定量检测土壤中博德特氏菌的DAPI-FISH方法.该方法可排除土壤颗粒的自动荧光对细菌信号的掩盖,保证图片中有大量微生物供统计分析,还能有效保存微生物的原位信息.应用该方法分析土壤中1,2,4-三氯苯降解菌-博德特氏菌,结果未受氯苯污染的农田土壤中没有检测到博德特氏菌,而氯苯污染土壤中检测到大量的博德特氏菌,每克土壤含3.78×10~6个.将该污染土壤中分离的博德特氏降解菌及其降解菌群接种至农田土壤中,降解菌的数量均随培养而增加,一个月后分别占DAPI计数的1.7%和3.8%.本研究设计的探针可有效用于复杂环境样品中博德特氏菌的定性与定量检测.