大苞萱草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 沈鹏 董丽
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 大苞萱草 ISSR-PCR 正交设计 单因子试验
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 129-133
• 分类号: Q94
• 字数: 4205字
• 语种: 中文

摘要

分别采用正交设计和单因子试验两种方法对影响大苞萱草ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物) 在3个水平上进行优化试验.正交设计选用L9 (34 )方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平.单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平.两种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了大苞萱草ISSR-PCR的最佳反应体系.在20 μL的反应体系中:Taq酶1 U,Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTP 0.20 mmol/L,引物0.4 μmol/L ,1×PCR buffer ,30 ng模板DNA.在此基础上筛选出10个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董丽	北京林业大学园林学院	153	1829	22.0	35.0
2	沈鹏	北京林业大学园林学院	1	9	1.0	1.0