hBcl-2和hVEGF_(165)双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 何晓青 倪晓彬 刘世明 刘启才 董颀 赵路宁 陈敏生
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: hBcl-2基因 hVEGF165基因 双基因共表达 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 319-322
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3727字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2010.03.020

摘要

目的 构建hBcl-2和hVEGF_(165)双基因共表达的重组腺病毒载体,为后续基因转染和动物实验提供实验基础.方法 通过RT-PCR从A549细胞中分别获得hBcl-2和hVEGF_(165)基因片段,并克隆到pMD-19T载体.将目的 基因hBcl-2、IRES元件和hVEGF_(165)依次定向克隆到腺病毒穿梭载体质粒pAd-Track-CMV上.线性化重组穿梭质粒后通过电穿孔转化含有腺病毒骨架质粒pAd-easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒.脂质体转染线性化的重组腺病毒载体质粒于HEK293细胞以包装制备重组腺病毒.重组腺病毒经PCR鉴定之后进一步扩增、纯化.通过荧光计数确定病毒感染滴度.结果 克隆的hBcl-2和hVEGF165基因测序正确,酶切重组穿梭载体质粒和腺病毒载体质粒得到特异酶切产物,重组腺病毒载体质粒转染HEK293细胞3 d后观察到GFP的表达,重组腺病毒的PCR得到hBcl-2和hVEGF_(165)基因的PCR产物,滴度测定为5×109 pfu/mL.结论 成功构建制备了高滴度的hBcl-2和hVEGF_(165)双基因共表达的重组腺病毒载体,为联合基因治疗心肌梗死的研究提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何晓青	广州医学院第三附属医院心内科	13	38	5.0	5.0
2	倪晓彬		2	9	1.0	2.0
3	刘启才		1	1	1.0	1.0
4	赵路宁		1	1	1.0	1.0