重组hIFN-α-2b-BCG的冻干制备及生物特性的研究

• 作者: 孙二琳 范晓东 赵杰 韩瑞发
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 干扰素α-2b 卡介苗 重组,遗传 质粒 冷冻干燥法 酶联免疫吸附测定
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 929-932
• 分类号: R9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2010.11.001

摘要

目的:研究重组hIFN-α-2b-BCG真空冷冻干燥的制备工艺,研究冻干后生物特性的变化.方法:采用真空冷冻干燥法制备重组BCG(rBCG),筛选最佳工艺参数.平板计数法比较冷冻干前后的活菌数,计算存活率.比较冻干前后rBCG的抗酸染色特征与形态,连续测定OD值,绘制生长曲线,酶联免疫吸附测定(ELISA)IFN-α-2b表达水平.PCR和抗性培养分析冻干后的质粒稳定性.结果:冻干后重组BCG为(6.51±0.33)x106CFU/mL,冻干前为(1.02±0.11)×107 CFU/mL,存活率约65%,达到BCG生物免疫治疗所需的活菌标准.冻干前后的菌落形态、生长曲线及抗酸染色特征无明显差异.质粒插入基因稳定率91.7%,丢失率为8.3%.冻干前后分泌IFN-α-2b水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:成功制备了重组hIFN-α-2b BCG冻干制剂,活菌数达到生物免疫治疗标准,其生物学特性和质粒稳定性均可耐受冷冻、低温与真空干燥过程中的不利影响.