膀胱上皮特异性重组腺病毒的构建及其对膀胱癌细胞的抑制作用

• 作者: 付生军 何向东 周钦 张红娟 王含章 王德贵 王志平 田俊强 金伟伟 魏海燕
• 来源期刊: 现代泌尿生殖肿瘤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组腺病毒 人类uroplakinⅡ 膀胱癌细胞株
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 173-177
• 分类号: R73
• 字数: 3883字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1674-4624.2010.03.014

摘要

目的 构建特异作用于尿路上皮细胞的重组腺病毒并研究其对膀胱癌细胞株的抑制作用.方法 RT-PCR测定人类uroplakinⅡ(hUPⅡ)基因的表达模式以及柯萨奇病毒腺病毒联合受体(CAR)对多重细胞系的影响.瞬时转染和荧光素酶检测分析技术测定hUPⅡ启动子的组织特异性.构建重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A和Ad-UPⅡ-Null,限制性内切酶酶切分析和PCR技术检测其构建的正确性.Westernblot分析细胞感染重组腺病毒后腺病毒E1A蛋白在膀胱癌细胞株BIU-87中的表达.测定重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对于膀胱癌细胞系BIU-87细胞的抑制作用.结果 膀胱癌细胞系BIU-87细胞表达hUPⅡ和CAR,其中hUPⅡ启动子具有高活性.在细菌技术上使用同源重组,将hUPⅡ启动子和E1A基因插入到5型的重组腺病毒的基因组中.在BIU-87细胞感染重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A后,E1A蛋白的表达呈强阳性.MTT分析证实重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A抑制了膀胱癌BIU-87细胞的生长.结论 hUPⅡ启动子有高组织特异性.重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对膀胱癌细胞系BIU-87细胞有抑制作用.