羧甲基葡聚糖磁性纳米颗粒与脂质体介导人可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1的转染比较

• 作者: 吴强 宋蓓雯 杜新华 江丹 贾丽丽
• 来源期刊: 中华眼底病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 葡聚糖类 纳米粒子 脂质体 基因转移技术 血管内皮生长因子受体1
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 视网膜新生血管防治实验研究
• 页码范围: 231-235
• 分类号: R774
• 字数: 5026字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2010.03.09

摘要

目的 比较羧甲基化葡聚糖(CMD)磁性纳米颗粒与脂质体LipofectamineTM2000对人可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1(sFlt-1)第2～4区基因片段的转染率.方法 构建真核表达质粒编码增强型绿色荧光蛋白质粒(pcDNA3.1-EGFP)/sFlt-1(2～4),采用酶切、电泳及基因测序鉴定.将实验分为磁颗粒组、脂质体组和未转染对照组进行.转染后24、48 h,倒置相差荧光显微镜下观察细胞绿色荧光分布;流式细胞仪检测细胞绿色荧光表达率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹(Western blot)法检测sFlt-1(2-4)mRNA和蛋白表达;噻唑蓝(MTT)比色法观测细胞生长情况,计算各组细胞相对增长率(RGR);Hoeehst细胞核染色法观察各组细胞凋亡情况.结果 重组质粒pcDNA3.1/sFlt-1(2～4)酶切产物在琼脂糖凝胶电泳时出现大小为915碱基对的条带.流式细胞仪检测发现,磁颗粒组平均转染率为45%,脂质体组平均转染率21%;二者比较,差异有统计学意义(t=2.541,P<0.05).RT-PCR和Western blot观察发现,转染后48 h磁颗粒组细胞sFlt-1(2～4)mRNA和蛋白表达均明显高于脂质体组(t=2.454,2.398;P值均<0.05).转染后24、48 h,磁颗粒组RGR与未转染对照组间差异无统计学意义(t=1.436,P>0.05),脂质体组RGR与未转染对照组及磁颗粒组间差异均有统计学意义(t=2.412,2.545,P值均<0.05);磁颗粒组细胞凋亡率与未转染对照组间差异无统计学意义(t=1.436,P>0.05),与脂质体组间差异有统计学意义(t=2.236,P<0.05).结论 CMD磁性颗粒较脂质体LipofeetamineTM2000可获得更高的sFlt-1(2～4)基因片段转染率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴强	上海交通大学附属第六人民医院眼科	138	590	11.0	15.0
2	宋蓓雯	上海交通大学附属第六人民医院眼科	43	206	7.0	11.0
3	杜新华	上海交通大学附属第六人民医院眼科	67	277	9.0	12.0
4	贾丽丽	上海交通大学附属第六人民医院眼科	33	120	7.0	8.0
5	江丹	上海中医药大学附属龙华医院眼科	19	59	4.0	6.0