RMP基因沉默对肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响

• 作者: 曹锴 李敏 杨慧翠 王晓婷 盛伟华 连晓宁 郭云兰 魏文祥
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 癌,肝细胞 RNA干扰 细胞增殖 细胞运动 RPB5调节蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 15-20
• 页数: 6页
• 分类号: R735.7
• 字数: 4664字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2010.01.004

摘要

目的:建立RMP(RPB5-mediating protein)基因沉默的稳定细胞株,研究RMP小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的抑制作用.方法:首先,体外合成3条RMP基因的siRNA,并转染到SMMC-7721细胞中,RT-PCR检测3条siRNA对RMP基因表达的抑制作用,筛选出最佳干扰序列;然后,pGPU6-Neo-RMP-484真核表达载体转染,G418筛选出稳定干扰RMP基因的细胞株,RT-PCR法检测该稳定细胞株中RMP基因的干扰效率,MTT法检测RMP-siRNA对SMMC-7721细胞增殖及细胞黏附能力的影响,划痕实验检测细胞迁移能力的变化.结果:利用RNA干扰技术成功建立了RMP基因下调的稳定细胞株,与SMMC-7721细胞对照组比较,其RMP mRNA表达水平下调了(83.67±2.56)%.稳定转染siRNA的细胞株细胞增殖受到抑制,增殖抑制率可达(74.33±0.58)%.稳定转染细胞株的细胞黏附能力有所增加,迁移率则相应降低.结论:成功筛选出了稳定转染RMP-siRNA重组载体的细胞株.pGPU6-Neo-RMP-484重组载体能有效抑制RMP基因在肝癌SMMC-7721细胞内的表达,可作为RMP分子机制研究的细胞模型.RMP基因的下调能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,使其黏附率增加,同时细胞的迁移率降低.