层理鞭枝藻藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白β亚基Cys-155的藻胆色素共价偶联

• 作者: 周可澄 周明 夏坤 张娟
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 藻蓝蛋白β-CPC 藻红蓝蛋白β-PEC 裂合酶CpcT1 体内重组
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 页码范围: 353-360
• 页数: 8页
• 分类号: Q344~+.14
• 字数: 5179字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1035.2010.00353

摘要

层理鞭枝藻(Mastigocladus laminosus PCC7603)藻蓝蛋白β-CPC和藻红蓝蛋白β-PEC中均存在2个藻胆色素结合位点(cys-84和Cys-155),可与藻蓝胆素(简称PCB)发生共价偶联反应,已有研究证实编码基因为alr0617的裂合酶CpcS1是催化Cys-84与PCB共价偶联的裂合酶.在研究Cys-155与PCB共价偶联的过程中,通过BLAST软件同源性对比分析后,筛选出4个基因:cpcT1、cpcT2、cpcS1、cpcS,其中基因cpcT1和cpcS2,利用分子克隆的技术,根据实验需要转到载体pCDFDuet上,通过DNA电泳和蛋白质电泳挑选出正确的克隆.此4个基因对应的质粒与在大肠杆菌内生成PCB必需的质粒pACYCDuet-hol-pcyA,以及质粒pET-cpcB(C84S)或pET-pecB(C84A),共同转入大肠杆菌BL21(DE3)内,进行体内重组,得到各重组蛋白,经过亲和层析柱提纯并透析,过滤掉金属离子,纯化透析后的蛋白经过活性比较、蛋白质电泳以及锌染色、蛋白质变性等试验以及荧光和紫外吸收光谱等鉴定,通过与相应文献中PCB光谱的比对,确定编码基因为all5339的裂合酶CpcT1能高效地催化Cys-155与PCB共价偶联,而其余3个基因不能起到催化作用.由此,能催化脱辅基蛋白β-CPC和β-PEC的两个位点共价偶联PCB的裂合酶均被发现.实验对于研究藻胆蛋白的生物合成、光合作用捕光机理以及藻胆体的组装等有重要的意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周明	华中农业大学生命科学技术学院	20	89	3.0	9.0
2	张娟	华中科技大学环境科学与工程学院	65	663	12.0	24.0
3	夏坤	华中科技大学环境科学与工程学院	4	11	1.0	3.0
4	周可澄	华中科技大学环境科学与工程学院	1	1	1.0	1.0