应用四倍体补偿技术建立血友病A小鼠模型

• 作者: 匡颖 卢希彬 张良梁 沈春玲 王津津 王铸钢 费俭 陆顺元
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血友病A 基因剔除 凝血因子Ⅷ 四倍体囊胚补偿技术
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-6
• 分类号: R5
• 字数: 6142字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2010.01.001

摘要

目的 建立凝血因子Ⅷ(factor Ⅷ,FⅧ)基因剔除小鼠模型,为研究治疗血友病A提供理想的动物模型.方法 应用ET克隆、胚胎干细胞同源重组和四倍体囊胚补偿技术,将小鼠FⅧ基因第16～19外显子靶向剔除,并应用PCR、逆转录PCR(reverse transcriptase-PCR,RT-PCR)及免疫组织化学染色技术,从DNA、RNA、蛋白水平检测FⅧ基因的转录及表达情况.通过检测激活的部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)和FⅧ的促凝活性(FⅧ∶C)进行FⅧ基因剔除小鼠表型鉴定.结果 PCR检测在剔除小鼠中未扩增出FⅧ基因的条带;RT-PCR分析显示剔除区域该基因mRNA转录本缺失;免疫组织化学染色显示在雄性半合子(-/y)和雌性纯合子(-/-)小鼠的肝脏中凝血因子Ⅷ表达缺失;FⅧ∶C和APTT检测结果显示雌性杂合子(+/-)FⅧ活性为野生型(wt)的80%,其APTT值较wt略有延长,而-/y和-/-小鼠的FⅧ的活性仅为wt小鼠的8%和10%,且APTT值均大于120s.结论 FⅧ基因剔除小鼠具有与人类血友病A患者相似的表型,它的建立将促进我国血友病A治疗新技术的发展.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王铸钢		27	65	4.0	6.0
3	匡颖		1	6	1.0	1.0
4	王津津	上海交通大学医学院医学遗传学教研室	2	6	1.0	2.0
5	卢希彬		1	6	1.0	1.0
6	陆顺元		5	23	3.0	4.0
7	张良梁	上海中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所	1	6	1.0	1.0
8	沈春玲	上海中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所	1	6	1.0	1.0
9	费俭	同济大学生命科学与技术学院	17	71	4.0	8.0