产气荚膜梭菌实时荧光PCR方法的建立

• 作者: 孙朝晖 曾兰兰 李林海 王露霞 石玉玲 陈丽丹
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 产气荚膜梭菌 TaqMan探针 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 389-392
• 分类号: Q503|R378.8
• 字数: 3846字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.03.021

摘要

目的:利用荧光定量PCR技术,建立快速敏感特异的检测产气荚膜梭菌的方法.方法:以产气荚膜梭菌基因为靶序列设计引物和探针,以自产气荚膜梭菌菌株中提取的DNA为模板,优化引物和探针的浓度比,同时验证方法的特异性、敏感性.结果:建立的反应体系在上游引物浓度为0.45 μmol/L、下游引物浓度为0.15 μmol/L、探针浓度为0.3 μmol/L时,具有良好的特异性和敏感性,与创伤弧菌等12种相关细菌均无交叉反应;对纯菌检测的灵敏度低于10 CFU/反应体系.结论:建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,能对战时气性坏疽做出快速准确的报告,实现对这种战时高发疾病的安全、快速和定量检测.