先天性遗传性核性白内障家系致病基因GJA8突变型和野生型在真核细胞中的蛋白表达

• 作者: 刘平 刘建巨 王建文 郑建秋
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 先天性遗传性白内障 GJA8 突变型 CxS0
• 年，卷（期）: 2010,（15）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1062-1066
• 分类号: R3
• 字数: 4256字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2010.15.015

摘要

目的 克隆一个先天性遗传性核性白内障家系致病基因GJA8,研究该基因野生型(wGJA8)和突变型(mGJA8)在体外真核细胞系中的表达.方法 以正常人类和家系患者基因组DNA为模板进行PCR扩增,分别调取wGJA8和mGJA8.构建质粒pEGFP-N1-wGJA8和pEGFP-N1-mGJA8,经双酶切测序鉴定后分别转染COS7细胞,用荧光显微镜观察蛋白表达情况,Western印迹和免疫组化法检测蛋白表达.结果 目的 基因wGJA8和mGJA8克隆成功,经双酶切和DNA测序证实质粒pEGFP-N1-wGJA8和pEGFP-N1-mGJA8构建成功.荧光显微镜观察到野生型蛋白和突变型蛋白在体外培养的COS7细胞内均有表达,Western印迹和免疫组化显示基因wGJA8和mGJA8在COS7细胞中均有蛋白表达.结论 成功克隆出该家系致病基因wGJA8和mGJA8,完成了致病基因在真核细胞中的蛋白表达,为进一步研究该家系白内障的确切发病机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘平		211	863	12.0	19.0
2	郑建秋		16	45	4.0	6.0
3	王建文		6	7	2.0	2.0
4	刘建巨		6	17	2.0	4.0