激光诱导荧光毛细管电泳法优化随机寡核苷酸文库聚合酶链反应扩增的条件

• 作者: 付洁 季颖 宋海峰 王清清 高新
• 来源期刊: 分析化学
• 学科: 化学
• 关键词: 毛细管电泳 指数富集系统配基进化技术 聚合酶链式反应 寡核苷酸文库 适配子
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 622-626
• 分类号: O65
• 字数: 3929字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1096.2010.00622

摘要

寡核苷酸文库的聚合酶链反应(PCR)扩增是指数富集系统配基进化技术(SELEX)筛选适配子技术中的重要步骤.本研究采用毛细管电泳技术结合激光诱导荧光检测器(CE-LIF),通过对双链产物、PCR副产物以及剩余引物的考察,研究了寡核苷酸文库PCR扩增时的影响因素,并对其进行优化.结果表明,随机寡核苷酸文库的扩增与传统均一模板的扩增显著不同,其在扩增十几个循环时产物就达到最大值;此外,初始模板数、退火温度、DNA聚合酶浓度等条件也有所不同.因此, 在进行SELEX筛选之前必须对文库PCR条件进行详细优化.本研究中N39文库优化后的PCR扩增条件为:初始模板的量为105个分子,DNA聚合酶浓度0.05 U/μL,退火温度70 ℃,18个循环.本研究为利用SELEX技术有效筛选适配子,降低筛选的假阳性及提高特异性提供了参考依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋海峰	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	66	327	9.0	15.0
2	高新	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	25	142	7.0	10.0
3	王清清	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	13	61	3.0	7.0
4	付洁	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	17	39	3.0	5.0
5	季颖	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	3	9	1.0	3.0