重组人促甲状腺激素α亚基在大肠杆菌中的表达

• 作者: 孙蓓 张镜宇 曹晓娜 熊蔚俐 郭刚 马精彩
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 糖蛋白激素类,α亚单位 克隆,分子 重组,遗传 基因表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 167-169
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2010.03.003

摘要

目的:构建pGEX-3X/hTSHα大肠杆菌表达系统,制备重组人促甲状腺激素α(TSHα)亚基.方法:Trizol法提取新鲜人绒毛膜组织总RNA,将1 μg总RNA逆转录合成cDNA并以之为模板进行PCR扩增hTSHα亚基的完全编码序列.EcoR1和BamHI双酶切将所扩增的hTSHα基因定向克隆入表达载体pGEX-3X,转化感受态大肠杆菌Mach1-T1,IPTG诱导表达融合蛋白GST-rhTSHα.离心收集菌体,超声碎菌后获得包涵体.以梯度浓度降低的尿素溶液洗涤,8 mol/L尿素溶液溶解包涵体.包涵体溶解液经透析后复性进行SDS-PAGE鉴定及竞争性ELISA抗原性分析.结果:DNA序列分析证实重组pGEX-3X/h TSHα质粒含有读码框正确的hTSHα基因.PAGE显示重组质粒可表达产生36 ku大小的特异蛋白条带.ELISA结果表明,所表达的融合蛋白具有与抗人TSHα抗体相结合的能力.结论:成功构建了重组pGEX-3X/hTSHα表达载体,其产物具有hTSHα抗原性.