用注射器直接对睾丸打点注射EGFP生产转基因兔的试验研究

• 作者: 冯静 宋天增 张红琳 曾宪垠 杨剑波 杨华 皮文辉 石国庆 贾斌 赵宗胜 郭延华
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 睾丸注射 转基因兔 转基因
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 19-23
• 分类号: S811.5
• 字数: 2914字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2010.03.005

摘要

为探讨直接用 1 mL 注射器对睾丸打点注射pIRES2-EGFP建立操作方便、效率高、成本低、可批量生产转基因兔的可行性.选择4只成年新西兰雄兔,双侧睾丸内分别打点注射 0.5～0.8 mg/mL浓度的质粒 0.25 mL,第 3 周和第 8 周分别取4#和3#雄兔睾丸做冰冻切片,置荧光显微镜下观察是否发绿色荧光.其它雄兔于第 3 周开始参与配种,最后采新生仔兔耳组织提取其基因组进行 PCR 和 Southern 杂交检测阳性率.结果表明,雄兔睾丸冰冻切片于荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR 和 Southern 杂交检测表明在睾丸注射后的第 6 周和第 7 周进行配种所得后代阳性率最高.不同雄兔后代经 PCR 和 Southern 杂交检测平均阳性率存在差异(P<0.05),2#雄兔后代平均阳性率达到 56.46%,3#雄兔的最低达36.96%的阳性率.表明用注射器直接对睾丸打点注射外源基因生产转基因的方法操作简便、高效,为大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础.