一种新的人胚胎干细胞无饲养层培养方法的建立

• 作者: 习佳飞 何丽娟 岳文 张博文 曾泉 杨超 裴雪涛
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人胚胎干细胞 转染 人胎肝基质细胞 碱性成纤维细胞生长因子
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 660-665
• 分类号: Q813
• 字数: 4195字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.05.014

摘要

目的:以转染碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的人胎肝基质细胞株(FLSC)培养人胚胎干细胞(hESC),寻找更加安全、有效的体外培养扩增方法.方法:通过ELISA方法定量检测转基因的人FLSC条件培养基中bFGF的分泌量;以商业化的mTeSR1无血清无饲养层培养基、常规小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)条件培养基,以及转染bFGF的人FLSC条件培养基(bFGF/FLSC-CM)分别培养扩增H9细胞.通过观察hESC形态、免疫荧光染色、流式细胞检测及RT-PCR,检测hESC全能性标志物的表达.结果:ELISA方法检测bFGF/FLSC-CM中bFGF因子的分泌量为(770.09±17.28)pg/mL,而MEF-CM中bFGF因子的分泌量为(55.59±0.61)pg/mL,两者存在显著差异(P<0.01);在3种培养体系下,免疫荧光检测hESC全能性标志Oct-4、Tra-1-81抗体的表达均呈阳性,流式检测细胞表面阶段特异性胚胎抗原4(SSEA-4)抗体阳性细胞的比例均在99%左右;RT-PCR检测到hESC特异的转录因子Oct-4、Nanog、Sox-2的表达.结论:以转染bFGF的人FLSC条件培养基可以有效扩增hESC,可为临床应用提供一种安全、高效、低成本的无饲养层培养方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裴雪涛	军事医学科学院野战输血研究所	124	630	13.0	20.0
2	岳文	军事医学科学院野战输血研究所	23	90	6.0	8.0
3	曾泉	军事医学科学院野战输血研究所	5	12	2.0	3.0
4	杨超	军事医学科学院野战输血研究所	11	50	4.0	6.0
5	何丽娟	军事医学科学院野战输血研究所	2	1	1.0	1.0
6	习佳飞	军事医学科学院野战输血研究所	6	46	3.0	6.0
7	张博文	军事医学科学院野战输血研究所	1	1	1.0	1.0