构建人csp-B核基质结合区克隆及其介导的反转录载体

• 作者: 咎玉玺 张俊河 王俐 王天云
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 核基质结合区 csp-B 基因克隆 反转录载体 载体构建
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1948-1950
• 页数: 3页
• 分类号: R318
• 字数: 3771字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.11.012

摘要

背景:核基质结合区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列.大量实验表明,核基质结合区可以作为DNA复制的起始点或调控基因的转录,构建核基质结合区表达载体能提高外源基因表达水平,增强外源基因表达的稳定性及提高转化细胞稳定株的频率等.目的:通过克隆人基因组不同的核基质结合区片段,构建核基质结合区介导的包含氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因的反转录病毒载体pLXSN-MAR,以探索核基质结合区对基因表达的影响.方法:开放性实验于2007-01/12在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成.自行构建含氯霉素乙酰转移酶报告基因的质粒PLXSN-CAT载体.TaqDNA聚合酶、T_4 DNA连接酶、DNA Marker、限制性内切酶BamH I、凝胶纯化试剂盒、质粒提取试剂盒均购于大连TaKaRa公司;引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成.以人基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应扩增csp-B核基质结合区序列,克隆入反转录载体PLXSN-CAT中,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析鉴定目的基因.结果与结论:聚合酶链反应扩增的特异性片段长度为931 bp,以此构建的重组质粒命名为PLXSN-CAT-MAR,经BamH I酶切后显示5.9 kb和931 bp左右的两条片段,测序结果与Gen-bank中的人csp-B核基质结合区(Genbank序列号M62716)序列一致,证明人核基质结合区片段已成功克隆到了反转录载体PLXSN-CAT中.提示成功构建了PLXSN-CAT-MAR反转录表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王天云	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	76	498	10.0	20.0
2	张俊河	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	31	147	6.0	11.0
3	王俐	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	22	118	7.0	9.0
4	咎玉玺	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	3	1	1.0	1.0