家蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因BmSPI3的克隆与表达特征分析

• 作者: 吕正兵 周方平 张耀洲 郑青亮 须苏菊
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 家蚕 基因克隆 原核表达 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 496-502
• 分类号: S881.2|Q78
• 字数: 5052字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2010.03.020

摘要

Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用.从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728 bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(CⅠ-X3-CⅡ-X8-CⅢ-X14-CⅣ-X6-CⅤ-X13-CⅥ),且P1活性位点为赖氨酸(K),因此将该基因命名为BmSPI3(GenBank登录号:DN237641).通过PCR扩增BmSPI3基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-BmSPI3,并转化到E.coli BL21(DE3)表达,经SDS-PAGE电泳检测在约36 kD处有明显的蛋白表达条带.提取各发育时期蚕体和5龄幼虫各个组织的总RNA中荧光定量PCR,检测结果表明:BmSPI3在5龄幼虫期表达量最高,卵期最低;在5龄幼虫表皮中的表达量最高,在马氏管的表达量最低.推测BmSPI3对胰蛋白酶和类胰蛋白酶具有抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张耀洲	浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所	87	372	9.0	15.0
2	吕正兵	浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所	46	82	6.0	7.0
3	须苏菊	浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所	4	6	2.0	2.0
4	郑青亮	浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所	4	36	3.0	4.0
5	周方平	浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所	1	4	1.0	1.0