人PINK1抗血清的制备及其免疫活性物质在大鼠脑组织中的表达

• 作者: 于顺 孙晓红 李尧华 李昕 李继胜 杨慧 王年强 高华
• 来源期刊: 首都医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: PINK1 抗血清 大鼠 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 343-347
• 分类号: R742.5
• 字数: 3666字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7795.2010.03.012

摘要

目的 制备帕金森病相关蛋白PINK1抗血清并检测其在大鼠脑组织中的表达特征.方法 制备人PINK1基因重组蛋白,免疫新西兰大耳白兔获得抗PINK1抗血清;通过盐析法初步纯化、Western blotting法鉴定抗血清的敏感性和特异性、免疫组化法检测PINK1在大鼠脑中的分布.结果 人PINK1基因重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达;纯化蛋白制备兔抗血清经盐析纯化后,兔抗人PINK1抗血清特异性识别人PINK1基因重组蛋白及大鼠脑匀浆中40 000和66 000的蛋白质,与预期结果一致;免疫组化染色显示PINK1广泛分布在嗅球、皮质、海马、纹状体、小脑、黑质和红核.结论 制备了一种兔抗人PINK1多克隆抗血清;PINK1广泛分布于大鼠中枢神经系统;为以后深入研究PINK1表达的组织分布、细胞内定位及其生物学功能提供了有效地实验工具.