鲢骨骼肌过敏原小清蛋白的分离纯化及多克隆抗体制备与应用

• 作者: 刘光明 曹敏杰 汪宁 王锡昌 苏文金 蔡秋凤 陈昭华
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鲢 小清蛋白 纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 页码范围: 41-46
• 页数: 6页
• 分类号: Q51|S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2010.06264

摘要

小清蛋白是鱼类的主要过敏原,对该蛋白的研究不仅有利于过敏原检测方法的建立也可为低致敏性水产品的开发提供理论依据.通过组织捣碎、冷冻离心、热处理、Superdex 75凝胶过滤等方法从鲢白色肉中纯化得到过敏原小清蛋白.Tricine-SDS-PAGE显示,在非还原条件下,该蛋白呈分子量分别为12 ku、14 ku、24 ku的3个条带.而在还原条件下,仅有分子量为12 ku的条带.Western-blotting分析表明,分子量为12 ku、14 ku和24 ku的这3个条带都与小鼠抗蛙小清蛋白单克隆抗体(PARV-19)发生特异性反应,提示它们均为小清蛋白的不同形态.用纯化的小清蛋白制备多克隆抗体,经Protein A Sepharose亲和层析纯化得到高纯度的免疫球蛋白G(IgG).Dot-blot检测发现,抗体稀释至1/51200时仍能与纯化的小清蛋白有显色反应.用制备的多克隆抗体进行Western-blotting分析,能特异地检测4种鱼(鲤、鲢、鲫、黄鳍鲷)中的小清蛋白.