shRNA沉默β-catenin基因表达对人食管癌细胞生物学特性的影响

• 作者: 任宏政 文继舫 王金胜 纪爱芳
• 来源期刊: 中华病理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 食管肿瘤 癌,鳞状细胞 β连环素 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 835-841
• 分类号: R73
• 字数: 6148字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2010.12.010

摘要

目的 构建稳定抑制β-catenin表达的食管癌细胞克隆,观察shRNA介导的β-catenin基因沉默对人食管癌细胞生物学特性的影响,为以β-catenin为靶的食管癌基因治疗提供理论和实验依据.方法 通过细菌转化、酶切、测序鉴定和基因重组等方法构建针对β-catenin的RNA干扰质粒pGen-3-CTNNB1和阴性对照质粒pGen-3-con.利用脂质体介导转染技术转染人食管癌细胞系Eca-109,经G418筛选得到稳定抑制β-catenin表达的食管癌细胞模型(pGen-3-CTNNB1细胞);逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、细胞免疫荧光和Western blot检测RNA干扰组(pGen-3-CTNNB1)、阴性对照组(pGen-3-con)及未转染组(Eca-109)3组细胞中β-catenin的表达;建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察抑制β-catenin表达在活体内对肿瘤细胞生长能力的影响,免疫组织化学检测移植瘤组织中β-catenin的表达水平;体外浸润实验、迁移实验检测各组细胞的侵袭转移能力.结果 成功构建了针对β-catenin基因的RNA干扰载体pGen-3-CTNNB1,建立了稳定抑制β-catenin基因表达的食管癌细胞模型;与阴性对照组[(1.18±0.13)g]和未转染组[(1.38±0.21)g]比较,RNA干扰组[(0.42±0.09)g]移植瘤重量明显减轻(P＜0.05);瘤组织中β-catenin的表达水平明显降低;抑制β-catenin基因表达后,食管癌细胞的浸润能力显著降低,阴性对照组浸润细胞数为(81±5)个/HPF、未转染组为(77±6)个/HPF、RNA干扰组为(41±4)个/HPF(P＜0.01);迁移能力也显著下降,阴性对照组迁移细胞数为(73±5)个/HPF、未转染组为(69±5)个/HPF、RNA干扰组为(38±4)个/HPF(P＜0.05).结论 在人食管癌细胞Eca-109中存在β-catenin表达异常和Wnt信号通路的异常激活,抑制β-catenin基因的表达可以在裸鼠体内显著抑制食管癌细胞的生长,并降低其侵袭转移的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文继舫	中南大学湘雅医学院病理学系	150	976	16.0	23.0
2	任宏政	中南大学湘雅医学院病理学系	4	21	2.0	4.0
3	王金胜	山西省长治医学院附属和平医院中心实验室	2	7	1.0	2.0
4	纪爱芳	山西省长治医学院附属和平医院中心实验室	1	1	1.0	1.0