土壤镰孢菌Real-Time QPCR定量方法的建立及应用

• 作者: 刘金波 李文滨 李春杰 李淑娴 许艳丽 韩晓增 魏巍
• 来源期刊: 大豆科学
• 学科: 农学
• 关键词: 镰孢菌 实时荧光定量 PCR 绝对定量
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 655-658,662
• 分类号: S154.3
• 字数: 4171字
• 语种: 中文

摘要

基于镰孢菌ITS序列,设计一对应用于实时荧光定量PCR(Real-Time QPCR)反应的镰孢菌属特异性引物TS和TR,并建立了相应的Real-Time QPCR体系.应用该反应体系,绝对定量了无肥(NF)、化肥(NP)以及化肥配施有机肥(NPM)等3种施肥措施下大豆田土壤镰孢菌DNA含量.结果表明:引物TS和TR对镰孢菌属真菌有较好的特异性;Real-Time QPCR反应的扩增曲线中各梯度浓度标准品的循环阈值(Ct值)间隔均匀,熔点曲线无杂峰,标准曲线的相关系数R2=0.993,斜率为-0.2927;在大豆生育时期的苗期,NF、NP及 NPM 措施下土壤镰孢菌总DNA每克干土中含量分别为18.33、44.61和140.83 pg,且NPM 措施含量极显著高于NF 及 NP 措施(P＜0.01).