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摘要:
根据已知猪圆环病毒2型(PCV2)序列设计引物,PCR扩增出579 bp去除信号肽的ORF2基因片段,将其克隆人表达载体pGEX-4T-1的BamH I和Xho I位点构建重组质粒,转化Rossetta(DM3)进行诱导表达,经检测表达蛋白以包涵体形式存在.用GST蛋白纯化试剂盒纯化目的蛋白,SDS-PAGE检测只存在一条约45.3 ku的目的条带,纯度达到90%以上.Western blot分析表明纯化的目的蛋白具有良好的免疫反应性.以纯化的蛋白为抗原,建立了间接ELISA诊断方法及组装了试剂盒,确定了最适的抗原包被浓度为0.625 μg/mL,抗体稀释浓度为1∶100,确定临界值为0.371.该试剂盒与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)血清无交叉反应性;与北京世纪元亨公司ELISA试剂盒相比其特异性、敏感性、符合率分别为90%、93.3%、91%;对同份血清样品批内、批间重复性试验变异系数均小于10%;稳定性试验变异系数小于5%,在4 ℃条件下保存期可达12个月;对240份临床血清检出率为80%.结果表明,研制的ELISA诊断试剂盒具有良好的特异性、敏感性,重复性、稳定性,完全达到国内外同类产品质量要求,可大规模应用于临床检测.
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内容分析
关键词云
关键词热度
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文献信息
篇名 猪圆环病毒2型Cap蛋白表达及其间接ELISA诊断试剂盒研制
来源期刊 畜牧与兽医 学科 农学
关键词 PCV2 表达 间接ELISA 重组Cap蛋白
年,卷(期) 2010,(7) 所属期刊栏目
研究方向 页码范围 71-76
页数 分类号 S852.65
字数 4476字 语种 中文
DOI
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 王金良 154 750 13.0 19.0
2 沈志强 525 1950 18.0 25.0
6 董林 24 76 6.0 7.0
7 王艳萍 8 11 2.0 3.0
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研究主题发展历程
节点文献
PCV2
表达
间接ELISA
重组Cap蛋白
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
畜牧与兽医
月刊
0529-5130
32-1192/S
大16开
南京卫岗1号南京农业大学内
28-42
1950
chi
出版文献量(篇)
9512
总下载数(次)
18
总被引数(次)
39872
相关基金
山东省自然科学基金
英文译名:Natural Science Foundation of Shandong Province
官方网址:http://kyc.wfu.edu.cn/second/wnfw/shandongshengzirankexuejijin.htm
项目类型:重点项目
学科类型:
论文1v1指导