基孔肯亚假病毒模型的建立及其在模拟检测中的应用

• 作者: 刘大斌 周育森 安小平 张宝中 张昕 王盛 童贻刚
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 基孔肯亚病毒 假病毒 检测 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 641-645
• 分类号: Q75
• 字数: 3789字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.05.010

摘要

目的:构建含基孔肯亚病毒核酸序列的重组慢病毒载体,以之转染细胞以分泌含基孔肯亚病毒核酸序列的假病毒,利用该病毒建立基孔肯亚病毒的模拟检测方法.方法:人工合成基孔肯亚病毒部分保守性核酸序列,连入慢病毒载体,构建含基孔肯亚病毒核酸序列的重组慢病毒质粒pLenti-chik,该质粒连同辅助质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染293FT细胞;72h后收集上清,用特异引物进行荧光定量RT-PCR检测.结果:建立了一个仅能进行一次复制、高度安全的基孔肯亚假病毒模型;同时采用荧光定量RT-PCR建立了较灵敏的检测病毒分泌的方法.结论:假病毒可以模拟基孔肯亚病毒分泌,但较真病毒安全性更高;用荧光定量的方法可以很灵敏地检测病毒的分泌,为突发基孔肯亚病毒感染的检测做好准备.