利用细菌人工染色体同源重组对小鼠基因进行条件型敲除

• 作者: 刘勇 张玉建 王浩 王淼 王立良 邵一鸣
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 细菌人工染色体 同源重组 条件型基因敲除 打靶载体 Flox小鼠
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 5536字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.01.001

摘要

目的:探索通过细菌人工染色体(BAC)同源重组系统构建条件基因敲除载体的高效率方法,提高条件基因敲除小鼠(Flox小鼠)的构建效率.方法:利用作者自己构建的噬菌体重组酶系统,通过BAC同源重组进行条件型基因敲除载体构建工作.首先通过亚克隆构建了一系列载体含有同源臂的靶向质粒,线性化后,打靶片段经电穿孔法转入大肠杆菌内,与相应的BAC同源重组,再经过三步同源重组和一步位点特异性重组,构建小鼠条件型基因敲除载体.结果:高效率构建了小鼠基因的最终条件基因敲除载体.结论:通过BAC同源重组高效构建条件基因敲除载体,为条件基因敲除载体的构建提供了全新思路,并为FLox小鼠的建立,及相应基因在发育、生理、致病机制等方面的功能研究奠定了基础.