白桦cDNA-AFLP体系的优化和建立

• 作者: 刘雪梅 宋福南 邢磊
• 来源期刊: 东北林业大学学报
• 关键词: 白桦 cDNA-AFLP 优化
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 15-18
• 分类号: Q781
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5382.2010.10.006

摘要

为了建立适合白桦的cDNA-AFLP体系,对反应体系中的酶切、预扩增、选择性扩增的引物筛选等几个重要的影响因素进行优化,得到了适合白桦的cDNA-AFLP反应体系.选择白桦雄花为研究材料,用改良的CTAB法提取总RNA,采用低频酶EcoR Ⅰ和高频酶Mse Ⅰ酶切双链cDNA.通过研究发现,预扩增中Mg2+浓度为2mmol/L,引物浓度为0.3 μmol/L,dNTP浓度为0.25 mmoL/L,Taq酶浓度为1 U,退火温度控制在60℃时,预扩增结果较好.另外,从16对引物组合中选出11对选择性较好的引物组合,扩增的产物经过6%的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳和银染检测,得到清晰、分辨率高、信号强度明显且重复性好的结果,表明该cDNA-AFLP分析体系适用于白桦相关的功能基因的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋福南		10	223	7.0	10.0
2	刘雪梅		31	392	12.0	19.0
3	邢磊		4	26	3.0	4.0