Ⅱ型肺泡上皮细胞转染Napsin A基因对肺纤维化的干预作用

• 作者: 刘继柱 吕晓婷 汤艳 管淑红 许清 郑金旭
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺纤维化 细胞增殖 Napsin A A549细胞 上皮-间质转化
• 年，卷（期）: 2010,（46）
• 页码范围: 3294-3299
• 分类号: R5
• 字数: 5197字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2010.46.015

摘要

目的 探讨Napsin A基因转染至Ⅱ型肺泡上皮细胞对肺纤维化的作用和机制.方法 采用慢病毒载体质粒PLJM1构建重组质粒PLJM1-Napsin A,将Napsin A基因转染至Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞染色体中并鉴定.予转化生长因子β1(TGF-β1)刺激A549细胞构建体外肺纤维化模型,倒置显微镜下动态观察细胞形态学的变化;用MTT法检测A549细胞转基因前后受TGF-β1刺激情况下增殖能力的变化,并绘制生长曲线;分别用RT-PCR和Western印迹方法检测未转基因和转基因A549细胞被TGF-β1干预后其表达E钙蛋白和纤维连接蛋白基因和蛋白水平的变化,以判断其发生上皮-间质转化(EMT)的情况;用Western印迹方法检测A549细胞转基因前后表达黏着斑激酶(FAK)蛋白量的变化,探讨Napsin A干预肺纤维化的机制.结果 重组质粒PLJM1-Napsin A测序结果与设计序列完全符合,转Napsin A基因A549细胞表达Napsin A基因和蛋白均显著高于非转基因细胞组(P＜0.01).细胞经TGF-β1刺激后形态上演变为间质细胞,提示体外构建肺纤维化模型成功.MTT法检测转基因细胞在TGF-β1诱导下其增殖速度减慢(P＜0.05);E钙蛋白的基因和蛋白表达水平在体外肺纤维化模型中明显下调(E钙蛋白mRNA:A549-PLJM1:0.77±0.09,A549-PLJM1-Napsin A:0.79±0.03,A549+TGF-β1:0.41±0.05,A549-PLJM1+TGF-β1:0.40±0.05;E钙蛋白分别为:0. 76±0.06,0.73±0.09,0.20±0.05,0. 22±0.03,P＜0.01),相反纤维连接蛋白则明显上调(P＜0.01),但转染Napsin A基因后其变化幅度减小(P＜0.01,P＜0.05).体外肺纤维化模型中,细胞FAK蛋白表达量增多(A549:0.49±0.04,A549-PLJM1:0.50±0.06;A549-PLJM1-NapsinA:0.48±0.08;A549+TGF-β1:3.49±0.61;A549-PLJMI+TGF-β1:3.54±0.25,P＜0.01),但转基因细胞上调趋势显著小于未转基因细胞组(P＜0.01).结论 转染Napsin A基因至Ⅱ型肺泡上皮细胞可以抑制肺纤维化,其作用机制可能与抑制整合素信号传导通路有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑金旭	江苏大学附属医院呼吸科	86	437	10.0	16.0
2	汤艳	江苏大学附属医院呼吸科	11	114	6.0	10.0
3	管淑红	江苏大学基础医学与医学技术学院	12	57	4.0	7.0
4	吕晓婷	江苏大学附属医院呼吸科	4	16	3.0	4.0
5	刘继柱	江苏大学附属医院呼吸科	6	28	4.0	5.0
6	许清	江苏大学附属医院呼吸科	6	28	4.0	5.0