制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达

• 作者: 张春燕 李伟英 李金照 杨学惠 汪惠 赖百塘 韦攀健
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 野生型p53 缺失C-末端 p53 3'端非编码区 重组腺病毒 流式细胞仪散点图 绿荧光蛋白表达
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 470-476
• 分类号: R734.2
• 字数: 4410字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2010.05.17

摘要

背景与目的 p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53 C-末端负调控序列的作用.本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot, FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)表达.方法 利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明.三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达.结果 测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53 C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失.Ad-(empty carrier)无p53.FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增.801D包含了不同荧光强度比率的细胞.结论 构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier).流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赖百塘		30	178	8.0	12.0
2	韦攀健		7	14	2.0	3.0
3	汪惠		12	64	4.0	7.0
4	李金照	中国科学院生物物理所	3	12	1.0	3.0
5	李伟英		6	29	2.0	5.0
6	杨学惠		8	37	3.0	6.0
7	张春燕		3	23	2.0	3.0