棉花半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆、表达与活性研究

• 作者: 何晓红 孙全 李生伟 杨建平 江怀仲 江明锋 潘正 蔡应繁 陈敏 高运玲
• 来源期刊: 四川大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 陆地棉 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 基因克隆 原核表达 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 1441-1446
• 分类号: Q78
• 字数: 4160字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0490-6756.2010.06.043

摘要

通过从已构建好的突变体湘棉-18的cDNA文库中筛选分离出一个半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的全长cDNA序列,经测序和序列分析,发现该片段包含一个完整的开放阅读框,长378个碱基,编码125个氨基酸,氨基酸序列中包含了一个半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族的保守区段Gln-Val-Val-Ala-Gly;信号肽预测发现该序列包含一个N端信号肽,保守区分析该基因编码的氨基酸包含一个半胱氨酸蛋白酶抑制剂相似区域.半胱氨酸蛋白酶抑制剂在大肠杆菌中表达重组蛋白,在条件为30℃,IPTG 5 mmol/L,时间24～36 h时,CPI实现最优表达,Western Blotting分析表明表达的蛋白正确.通过木瓜蛋白酶活性抑制实验,结果表明该重组CPI具有一定的酶活抑制作用.