高原牦牛SRY基因的克隆与原核表达

• 作者: 冯瑞林 包鹏甲 曾玉峰 朱新书 梁春年 程胜利 裴杰 褚敏 郭宪 阎萍
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牦牛 SRY基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 107-112
• 页数: 6页
• 分类号: S823.8~+5
• 字数: 4601字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2010.01.021

摘要

为从分子水平了解牦牛的性别形成机制,对高原牦牛SRY(Sex-determining region on the Y chromosome,SRY)基因的编码区进行了克隆表达.以雄性高原牦牛血液为材料,从基因组DNA中扩增SRY基因编码区(单外显子)序列,将其克隆至pGEM-T easy载体并测序;将牦牛SRY基因编码区连接至pET-28a(+)载体,构建表达载体pET-28a/SRY;把表达载体pET-28a/SRY转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,在合适的条件下诱导表达;对表达产物进行Western-blot检测.结果表明:牦牛SRY基因(GenBank: EU547257)编码区长687 bp,编码229个氨基酸;成功构建了表达载体pET-28a/SRY,并且SRY蛋白得到了大量表达;Western-blot进一步验证了其表达成功.