力生长因子重组腺病毒载体构建及其在成骨细胞中的表达

• 作者: 唐丽灵 邱敏
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 力生长因子 腺病毒 转染 成骨细胞 载体构建 骨组织工程
• 年，卷（期）: 2010,（37）
• 页码范围: 6847-6851
• 分类号: R318
• 字数: 5324字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.37.002

摘要

背景:研究表明,力生长因子(mechano-growth faotor,MGF)能激活卫星细胞,促进成肌细胞增殖.在治疗肌损失、预防心肌损伤和修复神经损伤等方面有重要的作用.机械拉伸可使成骨细胞表达MGF,但是MGF对骨组织生理生化行为的影响机制尚不清楚.目的:应用携带MGF基因的重组腺病毒载体转染成骨细胞,观察MGF在成骨细胞中的表达.方法:将MGF基因插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建pAdTmck-MGF重组体.pAdTrack-MGF与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组,生成重组腺病毒质粒pAdEasy-MGF.脂质体介导pAdEasy-MGF转染293A细胞,包装成整的重组腺病毒Ad/MGF.用Ad/MGF感染原代培养的大鼠成骨细胞,荧光示踪计数法测定感染效率,RT-PCR法对重组腺病毒感染结果进行鉴定.结果与结论:实验构建的重组腺病毒载体Ad/MGF滴度可达8.5×108pfu/mL.Ad/MGF能高效感染体外培养的Wistar大鼠成骨细胞并表达目的基因,当感染复数为100时,感染效率最高.说明实验构建的Ad/MGF重组腺病毒可在大鼠成骨细胞中有效表达.