H5N1禽流感病毒HA和NA基因重组腺病毒共表达载体的构建

• 作者: 王青 胡建和 郑素玲
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 腺病毒载体 AIV H5N1 亚型 HA 和 NA 基因 载体构建
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 172-177
• 分类号: S8
• 字数: 4372字
• 语种: 中文

摘要

利用口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白具有自我裂解的功能,将其作为连接肽构建携带有H5N1亚型AIV HA和NA基因的重组腺病毒表达载体,进而为AIV基因工程疫苗的开发以及相关诊断试剂的开发提供依据.采用融合PCR的方法扩增出含有HSN1 AIV HA-2A-NA的基因,定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中,含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-HA-2A-NA与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-HA-2A-NA,将pAdeasyd-H5经Pac Ⅰ线性化后转染HEK293细胞株包装出含有HA-2A-NA基因的腺病毒pAd-HA-2A-NA.结果表明,构建的含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-HA-2A-NA和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-HA-2A-NA经PCR、双酶切及核苷酸测序测定无误.线性化后的pAdeasy-HA-2A-NA转染HEK293细胞包装成功获得腺病毒pAd-HA-2A-NA载体,经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达.本试验构建的含有AIV H5N1亚型HA-2A-NA基因的重组腺病毒表达载体,将为进一步研究开发基因工程疫苗提供病毒模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡建和	河南科技学院动物科学学院	140	452	10.0	15.0
2	王青	河南科技学院动物科学学院	69	227	10.0	11.0
3	郑素玲	河南科技学院动物科学学院	29	102	6.0	8.0