带组氨酸标签的斑马鱼p53真核表达载体的构建及表达鉴定

• 作者: 丁丽丽 刘明 吴宁 林秀坤 赵向忠
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: p53基因 斑马鱼 真核表达 HeLa细胞
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 195-198
• 分类号: Q95
• 字数: 2557字
• 语种: 中文

摘要

构建斑马鱼p53基因的真核表达系统,为下一步p53体内、外功能研究,以及为斑马鱼作为抗肿瘤药物筛选模型的构建和应用奠定基础.采用RT-PCR法从斑马鱼胚胎中扩增获得p53基因编码区,定向克隆到真核表达载pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1/his-p53,在起始密码前加入增强翻译的Kozak序列,并在终止密码前引入组氨酸标签便于检测和纯化,脂质体介导质粒转染HeLa细胞,RT-PCR和Western blotting 检测基因表达情况.结果表明,成功构建了斑马鱼p53真核表达载体,RT-PCR扩增出1 100 bp的转录产物,表达产物能被抗his单克隆抗体特异性识别,Western blotting呈现53 kD左右单一条带.斑马鱼p53蛋白在HeLa细胞中成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘明	中国科学院海洋研究所	207	1983	20.0	38.0
2	吴宁	中国科学院海洋研究所	108	3413	34.0	56.0
3	林秀坤	中国科学院海洋研究所	22	116	7.0	10.0
4	赵向忠	中国科学院海洋研究所	2	1	1.0	1.0
8	丁丽丽	中国科学院海洋研究所	2	1	1.0	1.0