增强型绿色荧光蛋白基因与hTIMP 1基因融合表达载体的构建及鉴定

• 作者: 周丽娟 徐昭 李广平
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 绿色荧光蛋白质类 金属蛋白酶类组织抑制剂 基因表达 遗传载体 开放读码框架 逆转录聚合 酶链反应 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 482-485
• 分类号: R4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2010.06.012

摘要

目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因与人组织型金属蛋白酶抑制剂1(hTIMP1)基因融合表达载体.方法:Trizol法提取总RNA,经逆转录合成cDNA.通过套式PCR获得hTIMP1开放读码框(ORF),将扩增产物与pEASY-Blunt Simple载体连接,进行序列分析.继而将该重组质粒和载体经XhoⅠ和HindⅢ双酶切,回收hTIMP1 ORF目的片段和pEGFP-C1载体大片段,将两者相连、扩增,筛选重组子进行PCR、双酶切鉴定及接头部分序列分析.结果:扩增得到hTIMP1 ORF约为624 bp,与预期长度相符.hTIMP1 ORF与pEASY-Blunt Simple载体相连,测序结果与GenBank相应序列比较,核苷酸序列无改变.hTIMP1 ORF与pEGFP-C1连接所得融合表达载体经PCR及双酶切鉴定(XhoⅠ和HindⅢ),证实hTIMP1 ORF插入pEGFP-C1.结论:成功构建EGFP基因与hTIMP1基因融合表达载体,为进一步研究hTIMP1蛋白的生物学功能和开展以hTIMP1为靶点的急性冠脉综合征的基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李广平		316	1698	18.0	26.0
2	周丽娟		49	263	8.0	13.0
3	徐昭		7	15	3.0	3.0