摘要:
目的 观察1,25-(OH)_2维生素D_3[1,25-(OH)_2D_3]对体外培养的恒河猴骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSC)分泌骨保护素和NF-κB受体活化因子配体(RANKL)的影响.方法 设置了10~(-12)、10~(-10)、10~(-8)moL/L 3种浓度的1,25-(OH)_2D_3试验组和一个空白对照组.在体外用含这3种浓度1,25-(OH)_2D_3的培养基和空白培养基连续培养恒河猴BMSC.通过四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖.通过酶联免疫吸附测试法(ELISA)检测碱性磷酸酶、骨钙素、骨保护素、RANKL的含量.通过茜红素染色检测矿化结节.结果 不同浓度的1,25-(OH)_2D_3对恒河猴BMSC增殖的影响均表现为少于7 d促进增殖,超过7 d抑制增殖,但没有明显的剂量依赖性(均P<0.05).1,25-(OH)_2D_3促进恒河猴BMSC向成骨细胞方向分化,各浓度组成骨分化指标碱性磷酸酶(ng/ml,7 d:31.40±1.25,26.50±0.50,28.47±0.25对13.48±0.26;10 d:33.37±0.68,35.30±1.57,33.27±0.67对17.14±0.55;13 d:35.37±0.12,30.47±0.25,30.27±1.25对16.55±1.13;均P<0.05)和骨钙素(ng/ml,7 d:4.47±0.29,4.00±0.60,3.73±0.78对1.63±0.55;10 d:5.63±0.57,5.17±0.15,4.30±0.10对2.17±0.15;13 d:7.03±0.15,5.53±0.25,5.27±0.31对2.23±0.55;均P<0.05)均较对照组明显升高,但各浓度组均未见典型矿化结节的形成.1,25-(OH)_2D_3促进恒河猴BMSC分化出的成骨细胞分泌骨保护素(pg/ml,7 d:72.57±0.67,68.00±1.75,64.23±0.87对30.13±1.72;10 d:62.03±1.62,51.80±1.30,28.93±0.95对18.13±1.40;13 d:65.13±0.71,62.43±2.11,44.93±1.63对36.70±0.95;均P<0.05)和RANKL(pg/ml,7 d:74.33±0.61,82.37±2.15,85.23±0.45对70.83±1.71;10 d:83.30±0.46,86.70±0.56,88.23±0.91对74.20±1.83;13 d:81.70±1.81,81.07±0.95,84.70±1.41对72.73±0.97;均P<0.05),RANKL的分泌量呈现先升高后下降的趋势,而骨保护素的分泌量则呈现出相反的变化,两者均表现出剂量依赖性.结论 1,25-(OH)_2D_3促进恒河猴BMSC向成骨细胞方向分化,并促进其分泌骨保护素和RANKL.