米曲霉pyrG基因克隆及其同源转化系统的建立

• 作者: 王金良 陈宏文
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组质粒 克隆 同源转化系统
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 202-205
• 分类号: Q785
• 字数: 3513字
• 语种: 中文

摘要

建立以乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶基因(pyrG)为选择标志,以米曲霉为宿主菌的同源转化系统.以米曲霉基因组为模板,通过PCR扩增获得pyrG基因,将该片段与表达载体pMD18-T相连,转化大肠杆菌DH 5α,经蓝白斑筛选、PCR快速筛选、酶切和测序验证,获得重组质粒pMD-pyrG,完成pyrG基因的克隆.序列分析表明该基因与米曲霉KBN616的pyrG基因编码序列的同源性为99.9%,两者经推导的氨基酸的同源性为99.6%.以米曲霉pyrG营养缺陷株为受体菌,通过PEG/CaCl2诱导的原生质体转化方法,将重组质粒导入该受体菌,使米曲霉pyrG缺陷株发生基因转化,成为pyrG+,由此成功建立了以pyrG为筛选标记基因、同型米曲霉pyrG基因缺陷株为受体菌的基因转化系统.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈宏文	华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室	33	268	9.0	15.0
2	王金良	华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室	1	9	1.0	1.0