变性高效液相色谱法定量分析胃黏膜环氧合酶-2基因启动子区甲基化水平

• 作者: 张联 张阳 李文庆 游伟程 潘凯枫 聂晓瑞
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 环氧合酶-2 甲基化 色谱法 高压液相 评价研究
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 54-57
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2010.01.014

摘要

目的 利用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术,建立定量分析环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因启动子区甲基化水平的方法 ,并应用于胃黏膜组织甲基化状态的检测.方法 利用亚硫酸氢钠-DHPLC技术,在55℃部分变性条件下,乙腈洗脱浓度梯度为4.0/min时,对COX-2基因启动子重要区域甲基化水平进行检测,并对10例胃镜活检石蜡组织标本进行测定.结果 以人早幼粒细胞白血病细胞系(HL-60)和人胃癌细胞系(MGC803)分别作为完全甲基化和非甲基化对照,建立COX-2基因启动子甲基化定量分析的标准体系.甲基化含量百分率与相应色谱峰比值具有良好的线性关系,回归方程为Y=1.0608×甲基化色谱峰高(M)/甲基化和非甲基化色谱峰高之和(M+u),R~2=0.9894.在此标准体系下测定10例胃黏膜组织标本中COX-2基因启动子甲基化含量百分率,发现甲基化阳性的2例异型增生病变中COX-2启动子甲基化含量百分率均高于甲基化阳性浅表性胃炎和慢性萎缩性胃炎(24.5%、18.4%对7.6%、9.6%).结论本研究建立了COX-2启动子甲基化含量百分率定量分析体系,并首次将其应用于小样本胃黏膜组织标本的检测,为大规模筛查人群胃黏膜COX-2甲基化水平奠定了基础.